第134章 黎明前的测序(第4/5页)
（random hexamers）做全转录本的逆转录。”
江河走到冰箱前，拿出逆转录试剂盒：“不需要特异性引物，我们在pcr阶段再用甲流通用的ha（血凝素）和na（神经氨酸酶）保守区引物去钓出目标片段。”
看着手里的试剂，江河眼神微动。
其实，如果这真的是一种完全未知的全新病毒，今晚的这几个小时根本连门槛都摸不到。
光是引物设计就能卡死全中国最顶尖的实验室两周时间。
但他不一样。
他记得h1n1的基因图谱，也知道它的外膜蛋白弱点，包括它最容易被哪种引物扩增。
基本就等同于，拿着标准答案，反向推导解题步骤。
所以效率才能这么高。
逆转录反应体系配制完毕。
放入pcr仪。
42c孵育60分钟，70c加热5分钟灭活逆转录酶。
凌晨5:30。
逆转录完成。
极其脆弱的rna终于变成了相对稳定的dna。
“准备pcr扩增反应。”
“我们要分别扩增它的ha基因、na基因、m基因以及pb1基因片段。”
pcr反应板在江河等人的熟练操作下加样完毕。
放入实时荧光定量pcr仪。
设置热循环程序：95c预变性5分钟，然后进行40个循环的95c变性15秒、60c退火延伸1分钟。
“大概需要一个半小时。”
江河脱下最外层的乳胶手套，看了一眼挂钟。
实验室里的六个学生已经疲惫不堪。
江河走到走廊上，翻出林振华厅长秘书的电话，拨了过去。
电话响了七八声才通。
“王秘书，我是江河，抱歉打扰您休息。”
“嗯……没关系，怎么了？”
“王秘书，我需要您立刻向林厅长汇报，附一院收治了一名墨西哥外商，目前已确认为极高危的不明原因重型肺炎，并且，省人民医院和市八医院在昨晚分别收治了与他有明确密切接触和环境接触的两名重症患者，我判断，这是一起典型的具有极强人传人能力的烈性呼吸道传染病。”
“？？”
躺床上的王秘书翻身而起，直接被吓出冷汗。
“你确定？地方疾控有上报吗？”
“疾控走流程太慢，我目前正在附一院孙长明教授的实验室里跑它的基因测序，现在，我希望省厅立刻动用行政力量，去寻找一辆出租车，司机姓林，三天前搭载过这名墨西哥外商，现在处于失联状态，他极有可能已经发病，如果他在城市里继续活动，后果不堪设想。”
“江河，你目前有确凿的实验室证据吗？”
“证据马上出来，但那个司机，多在外面待一分钟，就会多传染十个人，王秘书，人命关天。”
电话那头沉默了几秒。
“我知道了，我立刻向林厅长汇报，你那边一旦有实验室结果，第一时间通知我！”
江河看着手机，微微松了一口气。
——还好有厅长的联系方式！
早上7:15。
pcr仪扩增结束。
“跑个琼脂糖凝胶电泳看看有没有条带！”陆晓林立刻将pcr产物取出来。
十五分钟后，电泳结果在紫外凝胶成像仪下显现。
屏幕上，在对应扩增片段大小的位置，出现了极其明亮的特异性条带。
没有引物二聚体，没有非特异性扩增。
“漂亮！”陈浩忍不住挥了一下拳头。
江河：“准备测序反应，用纯化柱回收pcr产物，加入bigdye测序试剂，进行测序pcr。”
又是一轮精密操作。
上午10:00。
阳光已经彻底照亮了羊城的天空。
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江河走到冰箱前，拿出逆转录试剂盒：“不需要特异性引物，我们在pcr阶段再用甲流通用的ha（血凝素）和na（神经氨酸酶）保守区引物去钓出目标片段。”
看着手里的试剂，江河眼神微动。
其实，如果这真的是一种完全未知的全新病毒，今晚的这几个小时根本连门槛都摸不到。
光是引物设计就能卡死全中国最顶尖的实验室两周时间。
但他不一样。
他记得h1n1的基因图谱，也知道它的外膜蛋白弱点，包括它最容易被哪种引物扩增。
基本就等同于，拿着标准答案，反向推导解题步骤。
所以效率才能这么高。
逆转录反应体系配制完毕。
放入pcr仪。
42c孵育60分钟，70c加热5分钟灭活逆转录酶。
凌晨5:30。
逆转录完成。
极其脆弱的rna终于变成了相对稳定的dna。
“准备pcr扩增反应。”
“我们要分别扩增它的ha基因、na基因、m基因以及pb1基因片段。”
pcr反应板在江河等人的熟练操作下加样完毕。
放入实时荧光定量pcr仪。
设置热循环程序：95c预变性5分钟，然后进行40个循环的95c变性15秒、60c退火延伸1分钟。
“大概需要一个半小时。”
江河脱下最外层的乳胶手套，看了一眼挂钟。
实验室里的六个学生已经疲惫不堪。
江河走到走廊上，翻出林振华厅长秘书的电话，拨了过去。
电话响了七八声才通。
“王秘书，我是江河，抱歉打扰您休息。”
“嗯……没关系，怎么了？”
“王秘书，我需要您立刻向林厅长汇报，附一院收治了一名墨西哥外商，目前已确认为极高危的不明原因重型肺炎，并且，省人民医院和市八医院在昨晚分别收治了与他有明确密切接触和环境接触的两名重症患者，我判断，这是一起典型的具有极强人传人能力的烈性呼吸道传染病。”
“？？”
躺床上的王秘书翻身而起，直接被吓出冷汗。
“你确定？地方疾控有上报吗？”
“疾控走流程太慢，我目前正在附一院孙长明教授的实验室里跑它的基因测序，现在，我希望省厅立刻动用行政力量，去寻找一辆出租车，司机姓林，三天前搭载过这名墨西哥外商，现在处于失联状态，他极有可能已经发病，如果他在城市里继续活动，后果不堪设想。”
“江河，你目前有确凿的实验室证据吗？”
“证据马上出来，但那个司机，多在外面待一分钟，就会多传染十个人，王秘书，人命关天。”
电话那头沉默了几秒。
“我知道了，我立刻向林厅长汇报，你那边一旦有实验室结果，第一时间通知我！”
江河看着手机，微微松了一口气。
——还好有厅长的联系方式！
早上7:15。
pcr仪扩增结束。
“跑个琼脂糖凝胶电泳看看有没有条带！”陆晓林立刻将pcr产物取出来。
十五分钟后，电泳结果在紫外凝胶成像仪下显现。
屏幕上，在对应扩增片段大小的位置，出现了极其明亮的特异性条带。
没有引物二聚体，没有非特异性扩增。
“漂亮！”陈浩忍不住挥了一下拳头。
江河：“准备测序反应，用纯化柱回收pcr产物，加入bigdye测序试剂，进行测序pcr。”
又是一轮精密操作。
上午10:00。
阳光已经彻底照亮了羊城的天空。
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