第228章 100%（六更，求月票！）(第3/4页)
所有人都围了过来。
屏幕上跳出数据：
浓度：15ng/μl。
a260/280：1.95。
a260/230：2.03。
极度纯净的数据。
经历了跨国运输和反复冻融，他们依然靠这套提取工艺拿到了完美的样本。
“提取成功。”江河淡淡地说了一句，“按这个标准，把剩下的样本全部提出来，王教授，准备逆转录。”
“收到。”王晓晴立刻接过样本，走向另一边的操作台。
逆转录过程相对自动化。
利用特定的茎环引物，将极其微量的mirna逆转录成cdna。
时间一分一秒地过去。
窗外的天色逐渐暗了下来。
没有人提议吃饭。
所有人，接力完成每一个步骤。
晚上八点。
五十份样本的cdna全部准备就绪。
最关键的一步到来了。
“准备上qpcr机。”江河说。
易向晚和顾亦舟将配制好的pcr反应体系小心翼翼地加入96孔板中。
每一个孔里，都包含着引物、荧光染料、cdna模板和酶。
这套体系，是他们之前在1万倍稀释的极端低浓度下拉出来的。
江河拿起96孔板，放入qpcr仪的反应槽中。
压下盖子。
输入参数。
设定循环程序。
“开始运行。”
机器启动。
检测过程需要两个小时。
这两个小时，对实验室里的每一个人来说，都如同世纪般漫长。
如果扩增曲线是一条平滑的直线，没有起伏，说明患者在两三年前的血液中，并没有这些特异性mirna的异常表达。
那就意味着，早筛模型失败。
如果曲线能漂亮地拉起来，并且ct值（循环阈值）在有效范围内，则证明模型成立。
江河拉过一把椅子，坐在电脑前。
他不说话，其他人也不敢说话。
易向晚在操作台边走来走去。
“你别晃了。”顾亦舟烦躁地说。
“我紧张啊师兄，万一……我是说万一，欧洲那边的血清变质了怎么办？或者我们找的那些标志物其实在极早期根本不释放？”
“闭嘴。”所有人一起打断了他。
易向晚赶忙举手：“抱歉！”
第一阶段的变性、退火、延伸循环结束。
屏幕上依然是一片空白。
“怎么还没出线？”陆晓林手心已经出汗了。
蔡卓群沉声说道：“急什么，极早期的样本，浓度低，ct值肯定靠后。”
第三十个循环。
依然没有明显起伏。
第三十二个循环。
突然。
屏幕的坐标轴上，第一条曲线的尾部，出现了一个上扬角度。
所有人屏息。
第三十三个循环。
上扬的角度开始变大。
紧接着，第二条、第三条、第五条曲线……
第三十五个循环。
屏幕上爆发出密集的扩增曲线！
一条条平滑的对数扩增曲线，拔地而起！
没有任何杂乱的非特异性扩增！
而在另一侧的熔解曲线界面上，更是拉出了漂亮整齐的单峰！
“卧槽……”
易向晚直接爆了一句粗口。
王晓晴呼吸也急促起来：“内参曲线平稳，不存在加样误差……出来了，江河，和我们之前建立的300组健康基线相比，50份样本的特征mirna全部呈显著高表达！”
陈浩倒吸凉气。
陆晓林和蔡卓群对视了一眼。
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屏幕上跳出数据：
浓度：15ng/μl。
a260/280：1.95。
a260/230：2.03。
极度纯净的数据。
经历了跨国运输和反复冻融，他们依然靠这套提取工艺拿到了完美的样本。
“提取成功。”江河淡淡地说了一句，“按这个标准，把剩下的样本全部提出来，王教授，准备逆转录。”
“收到。”王晓晴立刻接过样本，走向另一边的操作台。
逆转录过程相对自动化。
利用特定的茎环引物，将极其微量的mirna逆转录成cdna。
时间一分一秒地过去。
窗外的天色逐渐暗了下来。
没有人提议吃饭。
所有人，接力完成每一个步骤。
晚上八点。
五十份样本的cdna全部准备就绪。
最关键的一步到来了。
“准备上qpcr机。”江河说。
易向晚和顾亦舟将配制好的pcr反应体系小心翼翼地加入96孔板中。
每一个孔里，都包含着引物、荧光染料、cdna模板和酶。
这套体系，是他们之前在1万倍稀释的极端低浓度下拉出来的。
江河拿起96孔板，放入qpcr仪的反应槽中。
压下盖子。
输入参数。
设定循环程序。
“开始运行。”
机器启动。
检测过程需要两个小时。
这两个小时，对实验室里的每一个人来说，都如同世纪般漫长。
如果扩增曲线是一条平滑的直线，没有起伏，说明患者在两三年前的血液中，并没有这些特异性mirna的异常表达。
那就意味着，早筛模型失败。
如果曲线能漂亮地拉起来，并且ct值（循环阈值）在有效范围内，则证明模型成立。
江河拉过一把椅子，坐在电脑前。
他不说话，其他人也不敢说话。
易向晚在操作台边走来走去。
“你别晃了。”顾亦舟烦躁地说。
“我紧张啊师兄，万一……我是说万一，欧洲那边的血清变质了怎么办？或者我们找的那些标志物其实在极早期根本不释放？”
“闭嘴。”所有人一起打断了他。
易向晚赶忙举手：“抱歉！”
第一阶段的变性、退火、延伸循环结束。
屏幕上依然是一片空白。
“怎么还没出线？”陆晓林手心已经出汗了。
蔡卓群沉声说道：“急什么，极早期的样本，浓度低，ct值肯定靠后。”
第三十个循环。
依然没有明显起伏。
第三十二个循环。
突然。
屏幕的坐标轴上，第一条曲线的尾部，出现了一个上扬角度。
所有人屏息。
第三十三个循环。
上扬的角度开始变大。
紧接着，第二条、第三条、第五条曲线……
第三十五个循环。
屏幕上爆发出密集的扩增曲线！
一条条平滑的对数扩增曲线，拔地而起！
没有任何杂乱的非特异性扩增！
而在另一侧的熔解曲线界面上，更是拉出了漂亮整齐的单峰！
“卧槽……”
易向晚直接爆了一句粗口。
王晓晴呼吸也急促起来：“内参曲线平稳，不存在加样误差……出来了，江河，和我们之前建立的300组健康基线相比，50份样本的特征mirna全部呈显著高表达！”
陈浩倒吸凉气。
陆晓林和蔡卓群对视了一眼。
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